Granüler Korneal Distrofisi Tip 1 Hastalarının Periferal Kan Mononükleer Hücrelerinde TGFBI Genindeki R555W Mutasyonunun CRISPR/Cas9 Teknolojisi ile Düzenlenmesi

Transforming growth factor beta-induced (TGFBI) geni 683 aminoasit rezidüsünden oluşan ve bir hücre dışı matriks elemanı olan transforming growth factor beta-induced proteinini (TGFBIp) kodlar. TGFBI proteinin kalp, karaciğer, pankreas, deri, kemik, tendon, böbrek, kan plazması, göz gibi vücudun çeşitli organlarında yüksek miktarda ifade edildiği bilinmektedir. TGFBI proteinin hücresel adezyon, göç, proliferasyon ve farklılaşma gibi süreçlere aracılık ederek fizyolojik ve patolojik süreçlerde önemli rol oynadığı bilinmektedir. TGFBI geninde bugüne kadar 70 farklı mutasyon tanımlanmış ve bu mutasyonların kanser, metabolik bozukluklar ve çeşitli korneal distrofilerine yol açtığı gösterilmiştir. Bu mutasyonlar tüm TGFBI genini kapsasa da 4, 11, 12 ve 14. ekzonlarda yer alan R124H, R124C, R124L, R555W, R555Q mutasyonları hotspot mutasyonlar olarak bildirilmiş olup R555W hotspot mutasyonunun ise granular kornea distrofisi (GCD) tip 1'e neden olduğu gösterilmiştir.Genom düzenleme tekniklerindeki son gelişmeler ile programlanabilir nükleazlar kullanarak istenen herhangi bir DNA dizisini değiştirmek mümkün hale gelmiştir. Günümüzde yaygın olarak kullanılan genom editing teknoljileri ZFN (Zinc Finger Nucleases), TALEN (Transc ription Activator-Like Effector Nucleases) ve CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) teknolojileridir. ZFN and TALEN genomik bölgeyi hedeflemek için DNA binding domaine eklenen endonükleazlardan oluşturulurken, CRISPR tekniğinde bu olay guideRNA ve Cas9 aracığıyla gerçekleştirilmektedir. Bu endonükleazlar aracılığıyla oluşturulan çift zincir DNA kırıkları homolog rekombinasyon (HR) veya homolog olmayan uç birleştirmeleri (NHEJ) yoluyla tamir edilmektedir. Bu teknolojiler hedef genom bölgelerinin düzeltilmesinde hücrenin normal DNA tamir mekanizmalarını kullanmakta ve değişik genetik hastalıklarda genomun manupülasyonu amacıyla uygulanmaktadır. Projemizde GCD Tip 1 tanısı almış ve R555W mutasyonuna sahip olduğu PCR-dizi analizi ile belirlenmiş hasta bireylerden elde edilen lenfosit hücrelerinde CRISPR/Cas 9 tekniği ile R555W mutasyonunun düzeltilmesi amaçlanmıştır.