DIVA Yaklaşımına Yönelik Olarak, Sığır Brusellozisinin Tanısı İçin Protein Eldesi ve Hızlı Tanı Kiti Geliştirilmesi

Brusellozis, insan ve hayvanlarda Brucella ssp. tarafından oluşturulan bulaşıcı ve genellikle, subakut ve kronik seyirli zoonoz bir enfeksiyondur. Bu enfeksiyona Akdeniz ülkelerinde, Asya kıtasının batısında, Afrika kıtasının bir kısmında, Latin Amerika’da daha sık rastlanılmaktadır. Ülkemizde de enfeksiyon yaygın olarak görülmektedir ve korunmada aşı kullanılmaktadır. Her ne kadar kompetetif ELISA kiti bulunmakta ise de, aşılı ve enfekte hayvan ayrımındaki güçlükler nedeniyle serolojik teşhiste zorluklarla karşılaşılmaktadır. Ayrımın yapılabilmesi için aşı antijeni, test antijeni ve saha suşları arasındaki antijenik benzerliklerinin yada farklılıklarının, DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) yaklaşımı/stratejisine (aşılı-doğal enfekte ayırımı) uygun olarak araştırılması gerekmektedir. Yapmış olduğumuz ön çalışmada, Brucella abortus S19 (S19), Brucella abortus S99 suşları ve Brucella abortus saha izolatlarında, farklı DNA bölgelerinin belirlenmesine yönelik olarak oligonükleotid primerler dizayn edildi ve bu primerler kullanılarak Random Amplified Polimorfik DNA (RAPD) Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) analizi gerçekleştirildi. Çalışma sonunda, S19 suşunda olmayan farklı bir DNA bölgesi tespit edildi ve bu bölgenin dizi analizi yapıldı. NCBI Gen Bankasındaki B. abortus suşlarına ait dizilimler içerisinde hedef DNA bölgesi tarandı. Bu dizilimin B. abortus kromozomundaki yeri tespit edildi ve S19 haricindeki NCBI’da tanımlı B. abortus suşlarına ait belirli bölgelerde benzer bulundu. Elde edilen veriler, önceki yapılan çalışma sonuçları ile kıyaslandı ve bu bölgenin çalışılmamış bir bölge olabileceği düşünüldü. Bu projede, S19’da bulunmayan DNA diziliminin/bölgesinin B. abortus saha izolatlarındaki durumunun belirlenmesi, bu bölgenin rekombinant ve/veya sentetik protein şeklinde üretilerek DIVA ayırımı potansiyelinin araştırılması ve serolojik hızlı teşhis kitinin geliştirilmesi amaçlanmaktadır.