Antikanser bir bileşiğin Akut Myeloid Lösemi (AML) tedavisinde uygulanması için klinik-öncesi testlerin yapılması

Bu projede MDR-1 direnci gösteren ve nadir kanser hastalıkları arasında yer alan Akut Myeloid Lösemi (Avrupa’daki insidansı 0.7/10000) OCI-AML2 (CD33/CD15, dopamine reseptör ) kök hücre hattında sentezlenecek bir bileşiğin antikanser etkisi belirlenecektir. Bu amaçla, D2 dopaminerjik reseptörünü antagonize/invers-agonize eden ve thioridazine’den çok daha güçlü antikanser etki gösteren 1-(2-metiltiyo-10H-fenotiyazin-10-yl-propil)-5F/Cl/H-pirimidin-2,4(1H,3H)-dion türevleri sentezlenecek, karakterize edilecek, OCI-AML2 hücre hattında IC50 inhibisyonları tayin edilecek ve en fazla etkili antikanser bileşik ile ileri çalışmalar yapılacaktır. Referans bileşik olarak thioridazine ve karşılaştırmak için AML kemoterapi ajanları mitoxantrone, vincristine ve cytarabine kullanılacaktır. Etkili antikanser bileşik ve diğer ajanların AML kök hücresinde kemoterapi direncini kırıp kırmadığı MDR1 (p-glikoprotein) mRNA gen ekspresyonu seviyesinde q-RT-PCR (Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polmerase Chain Reaction) yöntemiyle tayin edilecektir. Etkili antikanser bileşik ve kemoterapi ajanlarının sebep olduğu hücre ölüm yolakları için P21, P16, P53, BAX, BCL-2, caspase-3, caspase-8, survivin, MAPILC3A/LC3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3 alpha), BCN1 (beclin-1), RIPK1/3 (Receptor interacting serine/threonine-protein kinase 1/3), ve HMGB1 (high-mobility group box 1 protein) mRNA gen ekspresyonları Q-RT-PCR yöntemiyle tayin edilecektir. Etkili bileşik ve kemoterapi ajanları ile muamele edilmiş AML kök hücrelerinin pluripotens, diferensasyon ve kendini yenileme (self-renewal) özellikleri için NANOG, OCT-4 ve SOX-2 mRNA gen ekspresyonları Q-RT-PCR yöntemiyle tayin edilecektir. Etkili bileşik ve kemoterapi ajanları ile muamele edilmiş AML hücrelerinin epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) geçişleri E-cadherin ve N-cadherin mRNA gen ekspresyonları çerçevesinde Q-RT-PCR yöntemiyle tayin edilecektir. Etkili bileşik ve kemoterapi ajanları ile muamele edilmiş kök hücrelerde P-glikoprotein down-regülasyonunun Ras-Raf yolağı ile bağlantısı Phospho-c-RAF (Ser338) Cellular Assay Kiti (Cisbio Bioassays) ile belirlenecektir. Etkili bileşik ve thioridazine’in D2-tipi (D2, D3a ve D4) dopamin reseptörlerine bağlanma sabitleri Tag-Lite Dopamine Receptor Kinetic Binding Assay Kiti (Cisbio Bioassays) ile tayin edilecektir. Etkili bileşiğin insan D2-dopaminerjik reseptöründeki polimorfizmine göre nasıl bir bağlanma afinitesi göstereceğini tespit etmek için bir biyoinformatik çalışması yapılacak, polimorfizmdeki genetik mutasyonları taşıyan D2-dopamin reseptörleri homoloji modelleme ile oluşturulacak, bunların etkili bileşik ile kompleksleri ve bağlanma afiniteleri DOCK yöntemiyle tayin edilecek, ve böylece etkili bileşiğin polimorfizme duyarlılığı in-siliko olarak tespit edilecektir. Etik kurulu onayı istemeyen C. elegans hayvanlarında cytarabine varlığı/yokluğunda etkili antikanser bileşiğin toksisitesine C. elegans yaşam süresini uzatıp uzatmadığına bakarak belirlenecektir. En etkili bileşiğin barsak absorbsiyonu CaCo-2 hücre hattında tespit edilecektir. Elde edilecek veriler sonrası etkili kanser bileşik için dünya patenti alıncaktır. Etkili bileşiğin AML tedavisinde faz çalışmalarına alınabilmesi için hayvan deneylerinin yapılacağı bir başka proje başvurusu yapılacaktır